原位杂交:
原位杂交是指用特定探针定位、检测DNA、RNA的一种有效的实验方法,通过把特点序列客隆到特殊载体上,通过转录酶反转一条天然的RNA探针,将探针和切片样品进行杂交,通过一系列显色方法,来确定RNA或者DNA表达区域;本中心原位杂交探针采用的是第高辛和生物素标记,灵敏度和同位素相当。 我们采用roche标记及显色试剂盒,GISH/ISH/FISH按照探针进行收费,每个试剂盒每条探针可以杂交60-80张玻片,收费为1万5千元,GISH杂交因需要加抗淬灭剂每条探针收费为1万9千元。量大优惠!
原位杂交第三天
1) 用1ml含10%热灭清的MABT溶液置换溶液,放置摇床上25分钟,然后用1mlMABT置换,25分钟,再用1mlMABT溶液置换,一小时以上,后用1mlMABT溶液置换,25分钟。
2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分钟。
3)将胚胎转入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。
4)每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5)将显色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗两三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。
6)4C冰箱保存。
原位杂交技术的技术流程
原位杂交技术的技术流程包括样本处理、探针制备、杂交反应和信号检测等步骤。样本处理包括组织或细胞的固定、包埋、切片和脱氧核糖核酸酶消化等步骤,目的是保持组织或细胞的原始结构和核酸序列的完整性。探针制备包括标记探针、纯化和变性等步骤,目的是提高探针的特异性和敏感性。杂交反应包括预杂交、杂交和洗脱等步骤,目的是使探针与目标核酸序列形成双链复合物。信号检测包括显色反应、荧光染色和性同位素标记等步骤,目的是可视化目标核酸序列的分布。
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